亚洲精品1区,jlzzjlzz亚洲女人,久久精品国产第一区二区三区,伊人天天综合

歡迎光臨上海懋康生物科技有限公司
主頁 > 技術(shù)文章 > 一起來了解一下什么是金擔(dān)子素A
技術(shù)文章
一起來了解一下什么是金擔(dān)子素A
   金擔(dān)子素A(Aureobasidin A,AbA)是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環(huán)酯肽類抗生素,具有很強的抗真菌能力。在較低的濃度下(0.1-0.5 μg/ml)即可對酵母產(chǎn)生毒性。對其敏感的真菌種類包括:出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.)。作用機制在于AbA抑制了真菌生長所依賴的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,干擾鞘脂合成,從而進一步殺死菌株。編碼IPC合成酶的基因研究較多的有來自釀酒酵母菌的AUR1 基因,以及構(gòu)巢曲霉的AURA基因,兩者具有同源性。通過對這些編碼基因進行突變即可使得菌株對AbA產(chǎn)生抗性,如AUR1-C基因。

  AbA非常適合用作陽性克隆子篩選用的藥物選擇性標(biāo)記。AbA抗性也是酵母單/雙雜交研究中理想的報告子。本品為溶于甲醇的AbA溶液,濃度為1 mg/ml。具體的工作濃度取決于宿主細胞的敏感度(見表1. AbA對各種酵母菌的低抑菌濃度(MIC))。

  金擔(dān)子素A的操作步驟(抗AbA的酵母轉(zhuǎn)化系統(tǒng))

  1)加入0.5 ml過夜培養(yǎng)的酵母到50 ml YPD培養(yǎng)基中(配方:1L液體培養(yǎng)基含有10g yeast extract,20g polypeptone, 20g D-glucose;固體培養(yǎng)基另外加入2%瓊脂;)。

  2)30℃培養(yǎng)約6小時,測定OD660為1~2。使用二倍體時,測定OD660為2~4。

  3)1,000×g離心5分鐘。

  4)用10 ml Solution A(配方:100 mM Lithium acetate,10 mM Tris-HCl pH 7.5,1 mM EDTA)懸浮沉淀,1,000×g離心5分鐘。

  5)用Solution A重懸沉淀,直到OD660為150。

  6)在管內(nèi)分取100 µl細胞懸浮液,30℃培養(yǎng)1小時。

  7)加入5 µg載體(環(huán)狀或線性DNA)和150 µg Carrier DNA,100℃加熱10分鐘,迅速冷卻。

  注:pAUR101需使用線性DNA進行轉(zhuǎn)化。使用環(huán)狀DNA會降低轉(zhuǎn)化效率甚至轉(zhuǎn)化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的質(zhì)粒DNA進行轉(zhuǎn)化。

  8)加入850 µl Solution B(配方:取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 ml Solution A充分溶解,需要現(xiàn)用現(xiàn)配),輕輕混勻。

  9)30℃培養(yǎng)30分鐘后,42℃培養(yǎng)15分鐘。

  10)室溫放置10分鐘。

  11)5,000 rpm離心1分鐘,用5 ml YPD培養(yǎng)基懸浮沉淀。

  12)30℃培養(yǎng)6小時~過夜。

  13)5,000~10,000 rpm離心,用1-10 ml 0.9% NaCl懸浮沉淀。

  14)在YPD選擇培養(yǎng)基平板(含有一定濃度的AbA,依菌株類型而定)上接種100 µl細胞懸液。30℃培養(yǎng)3-4天后轉(zhuǎn)化完成。

  15)挑取陽性轉(zhuǎn)化子,和/或測定轉(zhuǎn)化效率(以每微克質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化的菌落數(shù)來表示)。

  • © 2019 上海懋康生物科技有限公司 版權(quán)所有 技術(shù)支持:環(huán)保在線
  • 電 話:18616957973 傳 真:86-021-54736159 QQ號碼:1563822900 郵 箱:2971634497@qq.com 地 址:上海市閔行區(qū)虹梅南路2588號綠亮科創(chuàng)園1幢A棟321室
  • 備案號:滬ICP備16016464號-3 總訪問量:639977
在線客服 聯(lián)系方式

服務(wù)熱線

18616957973

日韩中文字幕一区二区高清99| 国产亚洲毛片| 亚洲一区二区三区| 97国产成人高清在线观看| 六月丁香久久丫| 高清不卡一区| 国产欧美日韩综合一区在线播放| 国产精品毛片| 97久久亚洲| 国产精品日韩精品在线播放| 日本美女久久| 人人狠狠综合久久亚洲| 99久久精品费精品国产| 奇米狠狠一区二区三区| 久久精品国产亚洲a| 国产高潮在线| 女主播福利一区| 国产视频一区免费看| 国产成人在线中文字幕| 欧美日韩一区二区国产| 日韩三区在线| 三级亚洲高清视频| 黑人一区二区| 久久成人综合| 成人性生交大片免费看96| 亚洲日本中文| 日韩和欧美的一区| 欧美美女福利视频| av手机在线观看| 亚洲激情亚洲| 欧洲杯什么时候开赛| 欧洲亚洲成人| 欧美视频久久| 日韩成人一级大片| 国产日产精品一区二区三区四区的观看方式 | 老司机免费视频久久| 欧美视频久久| 久久99精品久久久野外观看| www.久久爱.com| 亚洲日本黄色| 国产欧美日韩一级| 国产91在线精品| 日韩欧美一区免费| 欧美aaaaaaaaaaaa| 日av在线不卡| 欧美综合二区| 蜜臀av一区二区三区| 久久国产精品毛片| 久久成人精品| 日本欧美在线观看| 免费观看一级特黄欧美大片| 久久xxxx| а√在线中文在线新版| 免费av网站大全久久| 色喇叭免费久久综合| 成人激情诱惑| 日韩欧美国产精品综合嫩v| 91欧美在线| 一区二区乱码| 全球中文成人在线| 国模一区二区| 欧美影院一区| 久久亚州av| 国产在视频线精品视频www666| 国产成人免费视频网站视频社区 | 国产不卡一区| 国产精一区二区| 偷拍一区二区| 亚洲亚洲一区二区三区| 国产极品模特精品一二| 99视频精品全部免费在线视频| 亚洲高清二区| 噜噜噜91成人网| 阿v视频在线观看| 国产一区2区在线观看| 日本系列欧美系列| 欧美黄视频在线观看| 在线精品视频一区| 激情丁香综合| 视频一区二区三区在线| 日韩电影免费网站| 日韩精品福利网| 欧美激情在线精品一区二区三区| 亚洲黄页在线观看| 久久黄色影院| 午夜在线精品偷拍| 成人日韩精品| 亚洲五月综合| 911精品国产| 菠萝蜜一区二区| 国产精品成人一区二区不卡| 电影亚洲精品噜噜在线观看| 国产日韩一区二区三区在线| 欧美另类中文字幕| 狠狠久久伊人| 夜夜嗨一区二区三区| а√天堂8资源中文在线| 日韩专区视频网站| 日韩二区三区四区| 欧洲在线一区| 丝袜a∨在线一区二区三区不卡| 777午夜精品电影免费看| 伊人久久大香| 久久久国产精品一区二区中文| 性xxxx欧美老肥妇牲乱| 91视频综合| 久久久久97| 久久久777| 欧美国产美女| 久久资源综合| 久久久xxx| 国产污视频在线播放| 亚洲国产日本| 精品国产一区二区三区久久久蜜臀| 午夜精品婷婷| 一区二区久久| 成人三级av在线| 蜜臀av一区二区| 久久悠悠精品综合网| 欧美午夜精彩| 在线亚洲人成| 日韩av资源网| 久久xxxx精品视频| 亚洲精品极品| 欧美高清一区| 男人天堂久久| 欧美三级午夜理伦三级小说| 91视频综合| 亚洲精品中文字幕99999| 好看的亚洲午夜视频在线| 欧美在线免费| 久久久夜精品| 国产成人久久精品麻豆二区| 久久三级中文| 蜜臀国产一区二区三区在线播放| 欧美精品成人| 日韩av一级| 欧美啪啪一区| 青青一区二区| 亚洲综合av一区二区三区| 日韩电影在线免费观看| 蜜桃久久精品一区二区| 成人国产精品久久| 在线亚洲观看| 电影一区中文字幕| 免费中文字幕日韩欧美| 欧美激情1区| 久久国产高清| 亚洲美女久久| 黑人巨大精品欧美一区二区桃花岛| 欧洲精品99毛片免费高清观看| 樱桃成人精品视频在线播放| 美女www一区二区| 婷婷综合五月| 国产精品多人| 丝袜美腿一区二区三区| 亚洲黄色录像| 中文在线а√在线8| 日韩区欧美区| 亚洲成人不卡| 99久久精品国产亚洲精品| 久久精品一本| 欧美网站在线| 国产精品一区三区在线观看| 蜜臀av一区二区在线观看| 国产日韩一区二区三免费高清| 午夜激情电影在线播放| 精品国产午夜肉伦伦影院| 福利一区视频| 亚洲国产精品91| 欧美影院精品| 伊人成综合网站| 亚洲91中文字幕无线码三区| 久久这里只有| 制服诱惑一区二区| 日韩高清电影免费| 国产一区二区三区黄网站| 亚洲国产影院| 国产亚洲精品美女久久久久久久久久| 日韩成人精品一区二区| 久久99精品久久久久久欧洲站| 日本成人在线不卡视频| 男人的j进女人的j一区| 97久久精品| 欧美日韩综合| 日韩一区二区在线| 欧美日韩国产欧| 日韩欧美中文字幕一区二区三区 | 一本不卡影院| 日韩精品视频一区二区三区| 成人午夜一级| 免费久久99精品国产自在现线| 在线观看视频一区二区三区| 国产精品尤物| 日韩1区2区| 欧美最新另类人妖| 在线观看视频一区二区三区| 日本不卡视频在线观看| 日本一本不卡| 合欧美一区二区三区|